ڈچ محققین نے ایک تجرباتی ٹیسٹ میں CRISPR اور bioluminescence کو یکجا کیا۔انفیکشن والی بیماری

نیدرلینڈز کے محققین کے مطابق، ایک نیا تیار کردہ رات کا پروٹین وائرل بیماریوں کی تشخیص کو تیز اور آسان بنا سکتا ہے۔
ان کا مطالعہ، بدھ کو ACS پبلیکیشنز میں شائع ہوا، وائرل نیوکلک ایسڈز اور چمکتے ہوئے نیلے یا سبز پروٹین کا استعمال کرتے ہوئے ان کی ظاہری شکل کا تیزی سے تجزیہ کرنے کے لیے ایک حساس، ایک قدمی طریقہ بیان کرتا ہے۔
نیوکلک ایسڈ فنگر پرنٹس کا پتہ لگا کر پیتھوجینز کی شناخت طبی تشخیص، بائیو میڈیکل ریسرچ، اور خوراک اور ماحولیاتی حفاظت کی نگرانی میں ایک اہم حکمت عملی ہے۔بڑے پیمانے پر استعمال ہونے والے کوانٹیٹیٹو پولیمریز چین ری ایکشن (PCR) ٹیسٹ انتہائی حساس ہوتے ہیں، لیکن ان کے لیے نفیس نمونے کی تیاری یا نتائج کی تشریح کی ضرورت ہوتی ہے، جس سے وہ صحت کی دیکھ بھال کی کچھ ترتیبات یا وسائل کی محدود ترتیبات کے لیے ناقابل عمل ہوتے ہیں۔
نیدرلینڈ کا یہ گروپ یونیورسٹیوں اور ہسپتالوں کے سائنسدانوں کے درمیان ایک تیز، پورٹیبل اور استعمال میں آسان نیوکلک ایسڈ تشخیصی طریقہ تیار کرنے کے لیے تعاون کا نتیجہ ہے جسے مختلف ترتیبات میں لاگو کیا جا سکتا ہے۔
وہ فائر فلائی چمکوں، فائر فلائی گلوز، اور آبی فائٹوپلانکٹن کے چھوٹے ستاروں سے متاثر تھے، یہ سب بایولومینیسینس نامی ایک رجحان سے چلتے ہیں۔اندھیرے میں چمکنے والا یہ اثر ایک کیمیائی رد عمل کی وجہ سے ہوتا ہے جس میں لوسیفریز پروٹین شامل ہوتا ہے۔سائنسدانوں نے لوسیفریز پروٹین کو سینسر میں شامل کیا جو ہدف کو تلاش کرنے پر مشاہدے میں آسانی کے لیے روشنی خارج کرتے ہیں۔اگرچہ یہ ان سینسرز کو پوائنٹ آف کیئر کا پتہ لگانے کے لیے مثالی بناتا ہے، فی الحال ان میں طبی تشخیصی ٹیسٹوں کے لیے درکار اعلی حساسیت کی کمی ہے۔اگرچہ CRISPR جین ایڈیٹنگ کا طریقہ یہ صلاحیت فراہم کر سکتا ہے، لیکن اس کو کمزور سگنل کا پتہ لگانے کے لیے بہت سے اقدامات اور اضافی خصوصی آلات کی ضرورت ہوتی ہے جو پیچیدہ، شور والے نمونوں میں موجود ہو سکتے ہیں۔
محققین نے CRISPR سے متعلق پروٹین کو بائولومینسنٹ سگنل کے ساتھ جوڑنے کا ایک طریقہ ڈھونڈ لیا ہے جسے ایک سادہ ڈیجیٹل کیمرے سے پتہ لگایا جا سکتا ہے۔اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ تجزیہ کے لیے کافی RNA یا DNA نمونہ موجود تھا، محققین نے recombinase polymerase amplification (RPA) کا مظاہرہ کیا، یہ ایک سادہ تکنیک ہے جو تقریباً 100 ° F کے مستقل درجہ حرارت پر چلتی ہے۔انہوں نے ایک نیا پلیٹ فارم تیار کیا جسے Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS) کہا جاتا ہے، جس میں دو CRISPR/Cas9 پروٹین وائرل جینوم کے مختلف متصل حصوں کے لیے مخصوص ہیں، جن میں سے ہر ایک کے اوپر ایک منفرد لوسیفریز ٹکڑا منسلک ہے۔
جب تفتیش کار جس مخصوص وائرل جینوم کی جانچ کر رہے ہیں وہ موجود ہوتا ہے، دو CRISPR/Cas9 پروٹین ہدف نیوکلک ایسڈ کی ترتیب سے منسلک ہوتے ہیں۔وہ ایک دوسرے کے قریب ہو جاتے ہیں، جس سے کیمیکل سبسٹریٹ کی موجودگی میں برقرار لوسیفریز پروٹین بننے اور نیلی روشنی کا اخراج ہوتا ہے۔.اس عمل میں استعمال ہونے والے سبسٹریٹ کا حساب کتاب کرنے کے لیے، محققین نے ایک کنٹرول ری ایکشن کا استعمال کیا جس سے سبز روشنی خارج ہوئی۔ایک ٹیوب جو سبز سے نیلے رنگ میں رنگ بدلتی ہے مثبت نتیجہ کی نشاندہی کرتی ہے۔
محققین نے RPA-LUNAS پرکھ تیار کرکے اپنے پلیٹ فارم کا تجربہ کیا، جو پتہ لگاتا ہے۔SARS-CoV-2 RNAتکلیف دہ RNA تنہائی کے بغیر، اور nasopharyngeal swab کے نمونوں پر اپنی تشخیصی کارکردگی کا مظاہرہ کیاCOVID 19مریض.RPA-LUNAS نے 20 منٹ کے اندر SARS-CoV-2 کا کامیابی سے پتہ لگایا جس میں RNA وائرل لوڈ 200 کاپیاں/μL تک کم ہے۔
محققین کا خیال ہے کہ ان کی جانچ آسانی سے اور مؤثر طریقے سے بہت سے دوسرے وائرسوں کا پتہ لگا سکتی ہے۔"RPA-LUNAS نقطہ نظر کی دیکھ بھال کے لئے متعدی بیماری کی جانچ کے لئے پرکشش ہے،" انہوں نے لکھا۔